关于CHO细胞的培养方法
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  发布时间：2008-10-17 13:37:39

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休 闲 居 编 辑
CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）培养方法（正统法）
CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）培养方法（正统法）


※准备
?DMEM培养基
?PBS(-)
?Trypsin（0.25％）
?MTX（100μM）
?移液管
?自动移液枪
?废液缸
※培养基量
25c㎡?‥‥5ｍl
75c㎡?‥‥10ｍl
※操作顺序
①把培养瓶内的培养基用5ml的移液管转移到保存用的离心管里。
②用培养液量的1/2的PBS（25ml‥2.5ml）清洗细胞表面（2 次）。
③再用培养液量的1/10的（25ml‥0.5ml）的胰酶冲洗细胞表面
④再CO2培养厢里静置5分钟。（利用这段时间，准备好15ml的大离心管，并也好标签做好记号。）
⑤物理方法处理，（敲击培养瓶两侧）是细胞脱离，再用显微镜 认是否完全脱离。
⑥加入等倍量的（25ml‥5ml）培养基，充分冲洗培养瓶内表面，在连同细胞全部转移到大离心管中。
⑦离心分离（1,000rpm、4℃、10min）。（这段时间准备新的培养瓶，按照9/10的量（25ml‥4.5ml），加入培养液准备好。加入MTX的同时加入。）：　50nMMTX:2.5ulof100uM/final5ml培养液（这期间，要在培养瓶表面写上细胞培养的诸多条件和细胞的种类等等。）
⑧离心分离后，为了避免沉淀细胞扩散到溶液里，要迅速将上清用吸管吸除。
⑨加入培养液(DMEM+FBS,25ml‥5ml)，用移液管充分混匀细胞。
⑩按1/10量，（25ml‥0.5ml）将细胞悬浊液注入新培养瓶中。
?在CO2培养厢中37度条件下培养。培养液总量为5ｍｌ
注：使用的移液管为培养专用玻璃移液管，在上面吸口处，塞上棉花经过干热灭菌的。干热条件：180℃、3小时。

CHO细胞培养：
CHO细胞株置于RPMI1640培养基中，内含10%灭活小牛血清，青霉素100IU/mL，链霉素100IU/mL，置于37℃，5%CO2的培养箱（德国Heraeus）中培养。每隔48h换培液，当单层培养细胞汇合以后，用0.25%胰蛋白酶消化，传代培养。将培养瓶中的CHO细胞按1×105/mL传代移入培养板中，待进入对数生长期后（约24h）加药。
这是细胞的供给源:
CHO细胞由中科院上海生物化学和细胞生物学研究所提供。
这是我对此细胞的看法:
1.CHO细胞主要来源于中华仓鼠卵巢细胞.
2.与3T3(鼠纤维细胞)293(HEK)COS(猴肾细胞)HepG2(人肝细胞)C2C12(鼠肌细胞)Hl5(昆虫)AFT024(鼠基质细胞)一起,是重组DNA的主要载体细胞,常见于基因工程.
3.培养基可有多种选择,一般用RPMI1640培养基或DMEM培养基.

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